人骨形成蛋白3在昆虫杆状病毒表达系统中的表达、纯化及其诱骨活性检测

为了在昆虫杆状病毒系统中表达人骨形成蛋白 3(humanbonemorphogeneticproteoin3,hBMP3) ,检测表达产物的诱骨活性 .将hBMP3全长cDNA 1416bp克隆入转移载体K8中 ,再与病毒DNA经脂质体包裹后转染昆虫细胞Sf9.重组病毒经蓝白筛选后 ,用PCR方法扩增目的基因片段进行初步鉴定 .收集重组病毒的转染上清 ,肝素亲和层析纯化目的蛋白 .SDS PAGE和Western印迹进一步鉴定此蛋白 .体外培养MC3T3 E1细胞 ,经目的蛋白刺激后 ,检测细胞内碱性磷酸酶 (ALP)活性 .并将目的蛋白进行小鼠体内肌肉包埋实验 ,检测其异位诱骨活性 .结果显示 ,肝素亲和层析可以收集 1个高的洗脱峰 .SDS PAGE显示 ,非还原型样本为 32kD的二聚体蛋白带和少量 16kD单体蛋白带 ;还原型样本仅有相应大小的单体蛋白带 ,纯度达 80 % .Western印迹在相应位置呈阳性染色 .此蛋白刺激小鼠成纤维细胞 4 8h后 ,胞内ALP的活性增高 ,经rhBMP3作用后的细胞MTT染色减弱 .在小鼠股部肌肉内包埋蛋白样品 2～ 3周 ,组织学检测有成骨组织生成 .说明hBMP3在此套系统中获得了表达 .表达产物在体外可以刺激成骨细胞的分化 ,却抑制细胞的增殖 .小鼠体内异位诱骨实验进一步证实表达产物具有成骨活性     

蜜环菌胞外漆酶的合成、纯化及性质研究

研究了蜜环菌胞外漆酶合成条件和酶学性质。实验表明,培养基初始pH5.5、培养温度25℃有利于菌株产酶;与麦芽糖、山梨糖和半乳糖相比,纤维二糖和棉子糖作为碳源时漆酶产量更高;有机氮源比无机氮源有利于漆酶合成。泥炭提取液可显著诱导漆酶生成,当其含量为50%时,菌株漆酶最高产量是对照组的7倍。在蜜环菌发酵上清液中检测到3个漆酶同功酶组分,其主要活性（约占75%）组份漆酶A经 (NH₄)₂SO₄沉淀、制备级PAGE电泳和阴离子交换柱层析被分离纯化至电泳均一,SDSPAGE法测得酶亚基分子量59kD,凝胶过滤色谱法测定活性酶分子量58kD。纯化的漆酶A等电点pI为4.0,氧化愈创木酚的最适反应pH为5.6,最适温度为60℃,在60℃和65℃时半衰期分别为45min和36.8min,在pH5.2～7.2范围内稳定性较好。100mmol/L Cl^-对该酶有显著抑制作用,1mmol/L SO^2-₄ 对漆酶有激活作用,1mmol/L NaN₃可完全抑制酶活性,10 mmol/L EDTA对漆酶活没有明显影响,1mmol/L Cu²⁺对漆酶有激活作用。以愈创木酚为底物时,测得酶的K_m=1.026mmol/L,V_max=5μmol/(min·mg);以ABTS为底物时,测得其K_m=0.22mmol/L,V_max=69μmol/(min·mg)。     

有机铬对奥尼罗非鱼生长和糖利用的影响

研究了葡萄糖饲料和淀粉饲料中添加 2mg/kg有机铬对初始体重约 1 4g的奥尼罗非鱼鱼种生长和糖利用的影响。经过 8周饲养 ,添加烟酸铬和吡啶羧酸铬的葡萄糖组罗非鱼特定生长率显著高于对照组 (P <0 0 5 )。饲料效率在添加烟酸铬和吡啶羧酸铬的葡萄糖组和淀粉组均显著高于对照组 (P <0 0 5 )。全鱼营养成分分析表明 ,添加吡啶羧酸铬、乙酸铬的葡萄糖组罗非鱼水分含量显著低于相应的淀粉组 ,而粗脂肪含量显著高于相应的淀粉组 (P <0 0 5 )。添加吡啶羧酸铬的葡萄糖组肝脏果糖二磷酸酶活力显著低于相应的淀粉组 ,而背肌磷酸果糖激酶活力显著高于相应的淀粉组 (P <0 0 5 )。结果说明 ,有机铬能显著促进罗非鱼对葡萄糖的利用 ;罗非鱼对葡萄糖和淀粉的利用能力无显著差异 ,但饲料糖源对体成分有显著影响     

溶葡球菌酶在乳酸克鲁维酵母中重组表达、诱变、优化及酶学研究

根据模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)的溶葡球菌酶基因序列以及乳酸克鲁维酵母密码子偏好性设计引物扩增溶葡球菌酶基因表达片段,构建溶葡球菌酶(lysostaphin,Lys)基因表达载体(p KLAC1-Lys),转化乳酸克鲁维酵母(K.lactis GG799),实现了Lys基因的分泌表达。对重组菌株(K.lactis GG799/p KLAC1-Lys)进行NTG随机化学诱变,优化表达条件,筛选获得高表达菌株,并通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质。结果表明:通过诱变重组溶葡球菌酶乳酸克鲁维菌株,Lys酶比活性提高了约5.2倍(约8 000U/L)。最适接种量为40g/L,诱导过程中每24h添加一次终浓度为20g/L的半乳糖和NH_4NO_3可提高酶比活性,最适表达p H为7.0~7.5,最适反应p H为7.0~8.0,最适反应温度为37℃。实验表明,低于40℃,p H 3~6之间时,重组溶葡球菌酶较稳定。Sr~(2+)对其酶活性有明显的促进作用,Ba~(2+)、Ca~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)、Mn~(2+)、Mg~(2+)对其有明显的抑制作用。     

内固定术后股骨颈短缩的多因素分析及其对骨折的影响

目的:分析股骨颈短缩的发生率、对骨折愈合造成的影响以及造成颈短缩的影响因素。方法:选择在我院行闭合复位空心钉内固定术治疗并成功获得随访信息的老年股骨颈骨折患者106例作为研究对象。于术后1、3、6、12个月对患者进行门诊随访,记录患者的髋关节Harris评分、骨折愈合情况以及颈短缩的发生率,并将患者分为短缩组和无短缩组,对两组患者的骨折愈合率与髋关节Harris评分进行对比,并分析空心钉内固定术后颈短缩发生的危险因素。结果:短缩组43例,未短缩组63例。短缩组中骨折愈合率93.02%;未短缩组中骨折愈合率93.65%,两组骨折愈合率的差异无统计学意义(P>0.05)。短缩组中术后髋关节Harris评分为(74.58±7.85)分;未短缩组中术后髋关节Harris评分为(85.69±11.34)分,短缩组Harris评分低于未短缩组,差异有统计学意义(P<0.05)。颈短缩的发生与年龄、性别、骨折类型、骨密度值及骨折复位质量密切相关(P<0.05),与受伤至手术时间、置入方式、负重时间、住院时间无明显的相关性(P>0.05)。颈短缩的发生与骨密度值和骨折复位质量相关性最大,骨折类型与年龄次之,性别的相关性相对较小。结论:空心钉内固定治疗股骨颈骨折并发颈短缩的发生率较高,颈短缩会影响髋关节的功能,但不影响骨折的愈合。骨密度、骨折复位质量、骨折类型、年龄以及性别是颈短缩的独立影响因素。     

湘西地区农村7-15 岁儿童体重指数、血压及其相关性研究

目的:探讨湘西地区农村7-15岁儿童体重指数、血压及其相关性。方法:随机抽取湘西地区怀化市,吉首市,张家界市农村地区,于2011年1月到3月对7-15岁儿童进行调查。我们采用问卷调查法和体格检查法收集资料,采用中国肥胖问题工作组(WGOC)推荐的"中国学龄儿童青少年超重、肥胖筛查体重指数值分类标准"。高血压诊断采用文献中国儿童青少年血压参照标准评价肥胖和高血压。结果:1755名7-15岁儿童中,男性938人、占53.4%,女性817人占46.6%。男性BMI正常组838人、超重组7人和肥胖组30人,SBP分别为101.1±23.5 mmHg、103.9±12.0 mmHg、106.9±8.8 mmHg,DBP分别为66.7±9.0 mmHg、69.8±7.4 mmHg、71.7±9.1 mmHg。女性BMI正常组768人、超重组43人和肥胖组17人;SBP分别为101.3±35.1 mmHg、104.5±18.0 mmHg、109.1±9.8 mmHg,差异显著,有统计学意义(P<0.05),DBP分别为66.2±8.1 mmHg、71.1±8.8 mmHg、72.0±7.9 mmHg,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。制年龄和性别后,BMI与收缩压(SBP)和舒张压(DBP)成独立正相关关系(P<0.05);BMI正常组、超重组和肥胖组的高SBP发生率分别是1.3%、7.1%和15.2%,高DBP发生率分别是4.5%、9.2%和17.4%,高SBP发生率分别是5.3%、13.3%和32.6%,差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论:儿童BMI与SBP和DBP密切相关,儿童超重和肥胖增加高血压的发生风险,且高血压发生率随肥胖程度的增加呈现成倍上升趋势。     

茅苍术愈伤组织诱导及其细胞悬浮培养研究

采用正交试验法研究了不同的植物生长调节剂对茅苍术叶柄、叶片和根茎愈伤组织诱导的影响,结果表明,不同外植体在各自的最佳培养条件下,叶柄、叶片和根茎愈伤组织的诱导率分别为99.0%、83.5%和71.5%,以叶柄的培养效果最好,其中2,4-D对茅苍术愈伤组织的诱导具有极显著的效果,在各种植物生长调节剂组合中,诱导叶柄愈伤组织形成的最佳组合为0.4mg·L-1NAA、4.0mg·L-12,4-D和0.4mg·L-1KT,培养20d左右,诱导率达到99.0%。此外,将茅苍术叶柄细胞悬浮培养至18d时,细胞量、多糖和苍术素的含量均达到最大值,分别为9.07g·L-1、15.68mg·L-1和19.62ug·L-1。     

大沙鼠在柽柳沙包“肥岛”形成过程中的作用

灌木"肥岛"的形成和维持是物理和生物过程共同作用的结果。植物是影响灌木"肥岛"形成的关键因素;动物活动亦能影响土壤的理化性质,促进"肥岛"的形成。本文以中亚干旱区的代表性物种"柽柳"和"大沙鼠"为研究对象,研究了大沙鼠活动对柽柳沙包"肥岛"效应的影响。结果表明:无大沙鼠定居的柽柳沙包具有"肥岛"效应,但土壤养分含量并无显著提高;大沙鼠定居后,柽柳沙包出现明显的"肥岛"效应,土壤养分含量显著高于丘间对照地;大沙鼠活动促进了15～50cm深层土壤养分的富集,速效氮含量甚至是相同深度无洞柽柳沙包的2倍以上。表明大沙鼠活动促进了柽柳沙包"肥岛"的形成。     

圈养猕猴志贺氏菌的分离鉴定及药敏分析

目的确定猕猴感染志贺氏菌的状况,寻找有效治疗措施。方法采用不同选择培养基对13份病猴粪便样品进行分离培养、细菌革兰氏染色、镜检,并对分离的疑似菌株进行细菌生化鉴定和分子鉴定,经小白鼠致病性实验后,再用纸片扩散法测定分离菌株对23种抗生素的敏感性。结果从13份猕猴粪便样品中共检出12株志贺氏菌,检出率为92.31%,其中痢疾志贺菌(A群)1株、福氏志贺菌(B群)10株、宋内氏志贺菌(D群)1株;致病性试验结果表明,12株菌均能在72h内致死小白鼠,并能回收到注射的菌株;药敏试验结果表明,本实验中分离到的志贺氏菌对头孢噻肟(86.49%)最敏感,对头孢三嗪(75.00%)、头孢他啶(66.67%)次之,对多粘菌素B、羧苄西林、苄唑西林素等抗生素耐药性强。结论初步确定猕猴感染志贺氏菌普遍存在,进而引起腹泻、痢疾的可能性较大,头孢噻肟等为最敏感药物。     

纳米四氧化三铁双歧杆菌LTA缓解溃疡性结肠炎的研究

目的探讨纳米四氧化三铁双歧杆菌脂磷壁酸(Fe3O4-LTA)复合物缓解溃疡性结肠炎(ulcerative coli-tis,UC)的情况。方法 100只Babl/c小鼠随机分为5组,即阴性对照组(N)、溃疡性结肠炎阳性对照组(UC)、0.1 mg/mL纳米Fe3O4-LTA缓解组(L)、0.5 mg/mL纳米Fe3O4-LTA缓解组(M)、1 mg/mL纳米Fe3O4-LTA缓解组(H)。N组不施加作用,UC组、缓解组(L组、M组、H组)用2%葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulphate,DSS)自由饮用2周,2周后UC组不施加作用,L、M、H组分别采用0.1 mg/mL、0.5 mg/mL、1 mg/mL灌肠1 mL,每天1次,连续3周。观察临床体征和检测WBC、CRP、PCT、IL-18、IL-10。灌肠3周后处死小鼠,分离结肠黏膜上皮细胞,用RT-PCR法检测TLR2、TLR4的表达,用Western blot和免疫组织化学检测NF-κBp65的表达,组织病理切片评估缓解效果。结果纳米Fe3O4-LTA缓解1周后小鼠精神状态明显恢复良好,活动及进食增加,毛色有光泽。缓解组比UC组体重增幅大(P0.05);血液检测发现缓解组炎性指标不同程度下降,其中H组与其他组相比差异具有统计学意义(P0.05);RT-PCR检测显示:UC组与缓解组结肠黏膜上皮细胞内TLR2的表达要高于N组(P0.05),UC组TLR4的表达要高于N组和缓解组(P0.05)。NF-κBp65的Western blot和免疫组织化学染色显示UC组与缓解组的表达要高于N组(P0.05);病理组织切片和临床体征显示总缓解率达83.33%。结论纳米Fe3O4-LTA复合物具有较好缓解UC的能力。